روش انجام فلوسایتومتری | آموزش جامع تئوری و عملی

.

کاربرد فلوسایتومتری

.

.

1- تجزیه و تحلیل سلولی

.

فلوسایتومتری به طور معمول برای تجزیه و تحلیل سلول‌ها بر اساس ویژگی‌های مختلف میپردازد. ویژگی هایی نظیر اندازه، پیچیدگی سلولی و حضور نشانگرها یا مولکول‌های خاص در سطح سلول‌ها توسط فلوسایتومتری بررسی می‌شوند. در واقع، فلوسایتومتری به تحلیل و جداسازی تقریباً هر نوع سلولی که بتوان آنها را به صورت مناسب علامت‌گذاری کرده و ویژگی‌های آنها را اندازه‌گیری کرد، اختصاص داده می‌شود. نوع سلول مجهول نیز توسط فلوسایتومتری قابل شناسایی است.

برخی از سلول‌هایی که با فلوسایتومتری می‌توان آنها را از یکدیگر جدا کرد عبارتند از:

.

سلول‌های ایمنی: فلوسایتومتری به تجزیه و تحلیل و جداسازی انواع سلول‌های ایمنی مانند لنفوسیت‌ها (T-cell و B-cell)  اختصاص داده می‌شود.

.

سلول‌های خونی:.با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری سلول‌های خونی مانند لنفوسیت‌ها، نوتروفیل‌ها، ائوزینوفیل‌ها و بازوفیل‌ها می‌توانند تحلیل و جداسازی شوند.

.

سلول‌های سرطانی: این تکنیک برای تمایز سلول‌های سرطانی از سلول‌های سالم و همچنین برای مطالعه مختصری از ویژگی‌های زیستی سلول‌های سرطانی به کار می‌رود.

.

سلول‌های بنیادی (Stem Cell): سلول‌های بنیادی که قدرت تکثیر بالایی دارند و قابل تمایز به رده های سلولی مختلف هستند، نیز با این تکنیک قابل تجزیه و تحلیل هستند. از جمله این سلولها میتوان سلولهای بنیادی مزانشیمی را مثال زد.

.

سلول‌های عصبی: سلول‌های عصبی مانند نورون‌ها و گلیال‌ها نیز می‌توانند با استفاده از فلوسایتومتری تحلیل شوند.

.

.

2- تشخیص فلورسانس:

.

در بسیاری از موارد در تکنیک فلوسایتومتری، سلول‌ها یا ذرات با نشانگرهای فلورسانت (مانند آنتی‌بادی‌ها یا رنگ‌ها) علامت‌گذاری می‌شوند تا زمانی که در معرض تابش لیزر قرار گیرند، نور تابش دهند. این ویژگی تکنیک فلوروسنت به محققان این امکان را می‌دهد تا مولکول‌ها یا پروتئین‌های خاصی درون سلول‌ها را تشخیص دهند و غلظت آن را اندازه‌گیری کنند.

.

3- تجزیه و تحلیل چندپارامتره:

.

دستگاه‌های فلوسایتومتری می‌توانند به صورت همزمان چندین ویژگی را اندازه‌گیری کنند. بدین صورت این امکان را فراهم می‌کنند تا اطلاعات جزئی را درباره هر سلول به صورت مستقل در نمونه‌ها به دست آوریم. این ویژگی تجزیه و تحلیل سلولی را در زمینه‌های مانند ایمونولوژی، هماتولوژی، تحقیقات سرطان و دیگر زمینه‌ها بسیار مفید می‌کند.

.

4- جداسازی سلول:

.

فلوسایتومتری همچنین برای جداسازی سلول‌ها بر اساس ویژگی‌های اندازه‌گیری شده استفاده می‌شود. این امکان را فراهم می‌کند تا سلول‌های مختلف را از یکدیگر جدا کند. بنابراین کاربرد مفیدی در جداسازی انواع مختلف سلول‌ها برای تحلیل یا آزمایش‌های بیشتر دارد.

.

5- تعیین ساختار سلول:

.

فلوسایتومتری در موارد متعددی از جمله تعیین ساختار سلول‌های ایمنی، مطالعه پیشرفت چرخه زندگی سلول، تجزیه و تحلیل محتوای DNA و ارزیابی آپوپتوز (مرگ برنامه‌ریزی شده سلولی) مورد استفاده قرار می‌گیرد.

.

6- تشخیص بالینی:

.

فلوسایتومتری همچنین در آزمایشگاه‌های بالینی برای تشخیص برخی از بیماری‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرد، از جمله تشخیص سرطان های لوکمی و لنفوما که با توجه به شناسایی سلول‌های خون فرد انجام میشود.

.

.

آموزش عملی تکنیک فلوسایتومتری

.

تکنیک فلوسایتومتری یکی از روش‌های پیچیده و دقیق برای تجزیه و تحلیل سلول‌ها و ذرات در یک نمونه است. این تکنیک نیاز به آماده‌سازی دقیق نمونه‌ها و دستگاه فلوسایتومتر دارد. در اینجا یک راهنمای مختصر برای روش انجام تست فلوسایتومتری و اجرای عملی تکنیک فلوسایتومتری ارائه می‌شود:

• نکات پیشنهادی: قبل از آغاز، مطمئن شوید که دستگاه فلوسایتومتر و تمام وسایل آزمایشی به درستی تنظیم می‌شوند و کالیبر می‌باشند.

.

.

1- آماده‌سازی نمونه

.

نمونه مورد نظر خود را جمع‌آوری کنید. این نمونه های میتواند شامل نمونه خون، بافت، سلولهای ایمنی و یا سایر نمونه ها باشد. سپس نمونه بایستی تخلیص شود تا تنها سلول مورد نظر در نمونه وجود داشته باشد. برای تخلیص میتوانید از محلول ficoll paque نیز استفاده کنید. نمونه بایستی با PBS شستشو شود تا اجزای اضافی و الودگی ها پاک شود.

در مرحله بعد بایستی غلظت سلولهای نمونه با استفاده از یک هموسیتومتر یا دستگاه های مشابه اندازه گیری شود. به این صورت تعداد سلول ها در واحد حجم مشخص میشوند.

علامت‌گذاری (اختیاری): چنانچه برای تجزیه و تحلیل خاصی نیاز به نیاز به علامت‌گذاری (برچسب‌گذاری) سلول‌ها با رنگ‌های فلورسانت دارید، این مرحله را انجام دهید.

.

2- اعمال تنظیمات دستگاه

.

دستگاه فلوسایتومتر را روشن کنید و تنظیمات مورد نظر را اعمال کنید. این تنظیمات شامل تنظیم لیزر، فیلترها و پارامترهای دیگر است. دستگاه را با استفاده از استانداردهای دقیق کالیبره کنید.

.

3- تزریق نمونه

.

نمونه آماده‌شده را به دستگاه فلوسایتومتر تزریق کنید.

.

4- جداسازی و اندازه‌گیری

.

سلول‌ها و یا ذرات را با استفاده از لیزر به صورت تکی به سمت دتکتورها جهت اندازه‌گیری انتقال می‌یابند.

.

5- ثبت داده‌ها

.

دستگاه فلوسایتومتر ویژگی‌های سلول‌ها مانند اندازه، شکل و شدت فلوئورسانس را اندازه‌گیری کند. داده‌های دریافتی از اندازه‌گیری سلول‌ها در نرم‌افزار مربوطه دستگاه ثبت می‌شود.

.

6- تحلیل داده ها 

.

داده‌های اندازه‌گیری شده را تحلیل کنید تا اطلاعات مورد نظر را استخراج کنید.

.

7- گزارش‌دهی 

.

نتایج تحلیل را به صورت گزارش تهیه کرده و اطلاعات مربوط به نمونه را ثبت کنید.

.

8- تخلیه دستگاه

.

پس از اتمام تجزیه و تحلیل، دستگاه را تخلیه و به حالت استاندارد برگردانید.

.

.

خدمت انجام تست فلوسایتومتری

.

ساینس بازار آماده ارائه خدمت انجام تست آزمایشگاهی فلوسایتومتری به پژوهشگران گرامی، اساتید محترم و دانشجویان گرامی دارد. خدمت انجام سایر تست های آزمایشگاهی نظیر تست های ایمونولوژی و تست الایزا نیز ارائه میشود. همچنین محققان میتوانند مواد آزمایشگاهی مورد نیاز خود را با بالاترین کیفیت و کمترین هزینه از ساینس بازار خریداری نمایند.