تست MTT چیست؟
.
تست MTT یا سنجش 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide ، یک آزمایش سلولی رایج در آزمایشگاه های تحقیقاتی است. این تست جهت اندازه گیری زنده ماندن سلول و ارزیابی تکثیر سلولی استفاده می شود. این روش شامل افزودن رنگ زرد MTT به سلولها میشود که سپس توسط سلول‌های زنده متابولیزه میشود تا محصول فورمازان (formazan) بنفش را تشکیل دهد. مقدار فورمازان تولید شده با تعداد سلول های زنده ارتباط دارد.
پس از انکوباسیون، فورمازان حل می شود و میزان جذب به روش اسپکتروفتومتری اندازه گیری می شود. تست MTT به طور گسترده در تحقیقات و کشف داروها برای ارزیابی سمیت سلولی ترکیبات یا اثرات شرایط تجربی بر زنده ماندن سلول استفاده می شود. تست MTT یا بررسی اثر سمیت مواد و سنجش تکثیر و بقا سلول ها یک معیار کمی از سلامت سلول ارائه می دهد و اغلب در مطالعات مختلف بیولوژیکی، ویروس شناسی و زیست پزشکی استفاده می شود.
.
ویدیو روش عملی انجام تست MTT
.
.
روش عملی انجام تست MTT (تئوری)
.
سید کردن سلولها یا Cell Seeding:
سلول های مورد آزمایش خود (رده سلولی HELA, HepG2 و …) را در یک صفحه 96 چاهی با تراکم مناسب بر اساس نوع سلول و نیازهای آزمایشی کشت دهید.
.
اتصال سلولی (Cell Attachment):
اجازه دهید سلول ها تحت شرایط کشت استاندارد در پلیت به کف پلیت بچسبند تا بستر رشد آن ها فراهم شود.
.
مواجهه با ماده سمی مورد نظر (Treatment):
سلول ها را در شرایط آزمایشی خود در معرض مواد سمی که قرار است اثر سمیت آن بر زنده مانی و تکثیر سلولها بررسی شود قرار دهید. ماده مورد نظر میتواند شامل غلظت‌های مختلف دارو، زمان‌های مختلف یا سایر دستکاری‌های آزمایشی باشد.
.
اضافه شدن MTT یا (MTT Addition):
محلول استوک MTT (5 میلی گرم در میلی لیتر) در سالین بافر فسفات (PBS) تهیه کنید.
محلول MTT را به هر چاهک پلیت اضافه کنید و از مخلوط شدن کامل اطمینان حاصل کنید.
پلیت را در انکوباتور کشت سلولی به مدت 4-2 ساعت انکوبه کنید. زمان انکوباسیون بهینه ممکن است بسته به نوع سلول متفاوت باشد.
.
حذف محیط کشت:
محیط کشت حاوی محلول MTT را با دقت خارج کنید.
.
تشکیل فورمازن (Formazan Formation):
برای حل کردن بلورهای فرمازان تشکیل شده توسط سلول های زنده، یک محلول انحلال ساز (به عنوان مثال DMSO) به هر چاهک اضافه کنید.
.
انکوباسیون (Incubation):
برای اطمینان از حل شدن کامل فورمازان، پلیت را برای یک دوره اضافی انکوبه کنید.
.
اندازه گیری جذب (Absorbance Measurement):
جذب هر چاهک را در طول موج مناسب (معمولاً حدود 570 نانومتر) با استفاده از میکروپلیت خوان یا الایزا ریدر اندازه گیری کنید.
.
تجزیه و تحلیل داده ها:
تجزیه و تحلیل داده ها و مقایسه گروه های تحت درمان و کنترل را انجام دهید. مقادیر جذب متناسب با تعداد سلول های زنده است.
خدمت انجام تست MTT یا تست بررسی اثر سمیت مواد و سنجش تکثیر و بقا سلول ها توسط کارشناسان باتجربه ساینس بازار انجام میشود. تمامی پژوهشگران محترم از جمله اساتید محترم، دانشجویان گرامی و محققان میتوانند با مراجعه به وب سایت ساینس بازار نسبت به سفارش انجام تست MTT (برای سفارش تست کلیک کنید) اقدام نمایند.
با ارسال ماده مورد نظر خود و اعلام رده سلولی مورد نیاز برای آزمایش MTT میتوانید در کوتاه ترین زمان نتایج انالیز تست MTT خود را دریافت کنید.
ساینس بازار بستر خرید و فروش محصولات آزمایشگاهی و پزشکی، خدمات آزمایشگاهی و تجهیزات در حوزه پزشکی میباشد.
سایر خدمات انجام تست های آزمایشگاهی نظیر تست های سلولی (تست سیتوژنتیک، تست آنالیز کلونی زایی و …)، تست های ویروسی (تست استخراج و PCR ژن های ویروسی و …)، تست های میکروبی (کشت باکتری، جداسازی و شناسایی باکتری ها، تست آنتی بیوگرام و تست MIC و … ) و همچنین تست های مولکولی، خود را به ساینس بازار بسپارید.
