کیت آزمایشگاهی الایزا HIV

.

معرفی محصول:

.

کیت الایزا HIV ایدز (HIV 1&2) جهت شناسایی عامل بیماري ویروس HIV یا ویروس نقص ایمنی اکتسابی از خانواده رتروویروس‌ها می‌باشد که خود به دو زیر گروه 1 و 2 تقسیم می‌شود. ژنوم این ویروس از نوع RNA تک رشته‌اي و اندازه آن در حدود 9/7 کیلو باز است .
سندرم نقص سیستم ایمنی اکتسابی (AIDS) توسط فعالیت این ویروس در انسان ایجاد می‌گردد. از نظر پراکندگی، 1-HIV تقریباً در تمام مناطق جهان یافت می‌گردد ولی 2-HIV بیشتر مختص آفریقاي غربی و مناطق محدود دیگري از جهان می‌شود. میانگین زمان از ورود ویروس به بدن تا ظهور علائم بیماري بیش از 8 سال می‌باشد. این ویروس در طی دوره نهفتگی طولانی مدت خود در بدن با تکثیر و رشد در سیستم ایمنی سلولی و تضعیف آن باعث ایجاد عفونتهاي فرصت طلب
قارچی، ویروسی و انگلی شده و نهایتاً مرگ بیمار را سبب می‌شود. جداسازي و تشخیص همزمان آنتی‌ژن اختصاصی HIV-1 P24 و آنتی‌بادي‌هاي اختصاصی تولید شده علیه آنتی‌ژن‌هاي اختصاصی این ویروس در شناسایی افراد آلوده بسیار حائز اهمیت می‌باشد.

از میان روش‌هایی که امروزه جهت تشخیص این بیماري کاربرد دارند روش EIA یا الایزا جهت بررسی اولیه و تست غربالگري استفاده می‌شود، که در واقع از حساسیت بالایی برخوردار می‌باشد. نمونه‌هاي مثبت با این روش با روش تاییدي  Western blot مجدداً تست می‌شود و بررسی می‌گردد. کیت الایزای HIV حاضر از نسل چهارم الایزا با حساسیت و اختصاصیت بالا بوده و قابلیت اندازه‌گیري آنتی‌بادي اختصاصی علیه آنتی‌ژن‌هاي 1-HIV و 2-HIV سنجش آنتی‌ژن 24P را دارا می باشد. یک الی سه هفته بعد از ورود ویروس HIV به بدن فرد، سطوح آنتی‌ژن P 24 افزایش چشمگیري پیدا می‌کند؛ این در حالی است که هنوز آنتی‌بادي‌ها علیه آنتی‌ژن‌هاي ویروس HIV فابل رد یابی نیستند؛ ردیابی آنتی‌ژن P 24 در طی این دوره جهت تشخیص زود هنگام ابتلا به عفونت HIV بسیار حائز اهمیت می‌باشد .

.

اساس آزمایش:

.

اساس آزمایش در این کیت الایزا HIV بر روش Immunoassay Enzyme Sandwich Antibody & Antigen Combine استوار می‌باشد. چاهک‌هاي پلیت با آنتی‌ژن‌هاي نوترکیب 41gp و 120gp مربوط به 1-HIV و 36gp مربوط به 2-HIV و آنتی‌بادي اختصاصی HIV-1 P 24 پوشش می‌یابند. پس از افزودن سرم، در صورت وجود آنتی‌بادی‌هاي اختصاصی علیه HIV از جمله آنتی‌بادي‌هاي IgA-IgG-IgM، از طریق یک Fab به آنتی‌ژن‌هاي کف چاهک متصل و از طریق Fab دیگر به آنتی‌ژن‌هاي نشاندار با بیوتین در فاز مایع اتصال می‌یابند. همچنین در صورت وجود آنتی ژن 24P در نمونه این آنتی ژن ازطریق یک سایت آنتی ژنیک به آنتی بادي P 24 اختصاصی کوت شده‌ی در کف پلیت متصل و از طریق یک سایت آنتی ژنیک دیگر به آنتی بادي P 24 متصل به بیوتین در فاز مایع، متصل می‌گردد.

در آخر کمپلکس‌هاي آنتی‌ژن ساندویچ و آنتی‌بادي ساندویچ تشکیل می‌شود. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول آنزیم کونژوگه که حاوي استرپتاویدین نشاندار با آنزیم HRP می‌باشد به چاهک‌ها اضافه می‌شود. این استرپتاویدین به بیوتین کمپلکس هاي فوق متصل می شود. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول سوبسترا و کروموژن به چاهک‌ها اضافه می شود. رنگ آبی ایجاد شده بعد از این مرحله نتیجه تجزیه سوبسترا در اثر فعالیت آنزیم و تغییر رنگ محلول کروموژن ناشی از این واکنش می‌باشد. شدت این رنگ متناسب با تعداد کمپلکسهاي ایمنی ایجاد شده در چاهک‌ها می‌باشد. با افزودن محلول متوقف کننده رنگ آبی به زرد تبدیل می‌شود که بهترین جذب نوري را در طول موج 450 نانومتر دارد.

.

محتویات کیت:

.

• پلیت 96 خانه حاوي چاهک‌هاي پوششی با آنتی ژن‌هاي اختصاصی 1-HIV و 2-HIV و آنتی‌بادي اختصاصی HIV-1 P24 .
• محلول کونژوگه یک (1-Conj): یک ویال حاوي 0/75 میلی لیتر کونژوگه غلیظ (20X) این محلول را باید با محلول رقیق ساز کونژوگه قبل از مصرف به نسبت 1/20 رقیق نمود .
• محلول رقیق کننده کونژوگه یک (Conj-1 Diluent):یک ویال حاوي ml 15محلول جهت رقیق سازي کونژوگه غلیظ .
• محلول کونژوگه دو (2-Conj): یک ویال حاوي ml 12 محلول آماده‌ی مصرف استرپتاویدین نشاندار با با آنزیم HRP .
• سرم کنترل مثبت آنتی بادي (Antibody Positive Control):حاوي ml 1 سرم انسانی غیر فعال شده حاوي آنتی بادي علیه -1HIV و -2HIV .
• سرم کنترل مثبت آنتی ژن (Antigen Positive Control): حاوي ml 1 سرم انسانی منفی از نظر آنتی بادیهاي 1-HIV و 2-HIV حاوي آنتی ژن P24 نوترکیب .

.

شرایط نگهداری:

.

•  کیت الایزا HIV را در یخچال بین دماي 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداري نمایید.
• چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداري نمایید. پایداري پلیت بعد از باز کردن آن 4 ماه میباشد .
• پایداري محتویات کیت (قبل از باز شدن درب کیت) تا پایان مدت انقضاء یاد شده بر روي هر یک از آنها می باشد . توصیه میشود بعد از باز کردن کیت حداکثر در فاصله زمانی 4 ماه از آن استفاده نمایید .
• محلول شستشو را به نسبت 1/10 با آب مقطر رقیق نمایید این محلول (آماده‌ی مصرف) به مدت یک هفته در شرایط 8 -2 درجه سانتیگراد قابل نگهداري و مصرف می باشد .

.

نکات قابل ذکر برای مصرف کنندگان:

.

• محتویات این کیت تنها براي مصرف در همین کیت قابل استفاده هستند .
• این کیت صرفا جهت تعیین Antigen P24 و Anti-HIV در سرم و پلاسماي انسانی است.
• از مخلوط کردن نمونه هاي سرم پرهیز نمایید.
• کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود آنتی ژنهاي HBs ، HCV و HIV و آنتی بادیهاي HIV و HCV کنترل و فاقد این عوامل می‌باشد. کنترل مثبت آنتی بادي کیت حاوي آنتی بادیهاي HIV و از نظرآنتی ژن HIV غیر فعال است. کنترل مثبت آنتی ژن کیت حاوي آنتی ژن P24 نوترکیب می باشد. غیر فعال سازي سرم یا پلاسما بمدت نیم ساعت در 56 درجه سانتی گراد انجام می‌شود؛ جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار میکنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند.

• هنگام انجام آزمایش حتماً از دستکشهاي یکبار مصرف استفاده کنید. همچنین استفاده از عینکهاي آزمایشگاهی هنگام کار با سرمهاي بیماران توصیه می شود .
• سرمهاي مثبت از نظر آنتی بادیهاي ضد HIV، وسایل و محلولهاي wash مشکوك به آلودگی را بعد از اتمام کار  ضدعفونی کنید. به مدت حداقل 30 دقیقه در مجاورت محلول هیپوکلریت سدیم %5 یا محلولهاي مناسب ضد عفونی کننده دیگر قرار دهید. همچنین اتوکلاو ، به مدت 20 دقیقه در121درجه سانتی گراد نیز پیشنهاد می گردد .