نقد و بررسی
کیت الایزا anti dsDNA | تشخیص لوپوس اریتماتوز
کیت آزمایشگاهی الایزا anti dsDNA
.
معرفی محصول:
کیت الایزا anti dsDNA IgG جهت سنجش کمی و نیمه کمی حضور آنتیبادیهاي IgG علیه عامل DNA دو رشتهاي در سرم یا پلاسماي انسان
کیت الایزا anti dsDNA IgG جهت سنجش کمی و نیمه کمی حضور آنتیبادیهاي IgG علیه عامل DNA دو رشتهاي در سرم یا پلاسماي انسان میباشد. از این کیت به عنوان یک ابزار کمک تشخیص در بیماری لوپوس اریتماتوز سیستمیک (SLE) همراه با سایر تظاهرات بالینی به کار میرود.
.
بیماری لوپوس اریتماتوز سیستمیک (SLE):
.
لوپوس اریتماتوز سیستمیک (SLE) یک بیماري خود ایمن سیستمیک میباشد که با تولید اتو آنتیباديها و بروز طیف گستردهاي از تظاهرات بالینی شناخته میشود. حضور آنتیباديها علیه DNA دو رشتهاي (dsDNA) معیاري براي تشخیص SLE محسوب میگردد. رویکرد عملی در غربالگري اولیه بیماران استفاده ازروشی مانند ELISA است که هر دو نوع آنتی باديهاي با افینیتی پایین و بالا ضد dsDNA را شناسایی میکند.
.
تشخیص anti dsDNA:
.
یکی از مشکلات روش ELISA واکنش آنتیبادیها با DNA تکرشتهاي (ssDNA) است. آنتیبادیهاي ضد ssDNA فقط DNA تک رشتهاي را میشناسند. این نوع از آنتیباديها نه تنها در بیماران مبتلا به SLE بلکه در سایر بیماریهاي بافت همبند ماننداسکلروز سیستمیک و میوزیت هم یافت میشود.
بنابراین، استفاده از dsDNA بسیار خالص وهمچنین هضم ssDNA با استفاده از نوکلئاز 1S استراتژیهاي اساسی در تولید ELISA با کیفیت مناسب هستند. بر مبناي استفاده از روشهاي مختلف، شیوع آنتیبادي علیه DNA دو رشتهاي بین 20الی 80درصد بیماران SLE گزارش شد. به علت فراوانی بالا، حساسیت مناسب (%57) و ویژگی بالا (%70-80)، حضور این آنتیباديها میتواند به عنوان مارکر سرولوژي مهمی در تشخیص SLE محسوب گردد.
.
پایش دورهاي بالینی بیماران:
.
همچنین پس از تشخیص قطعی SLE، سنجش دورهاي آنتیبادي علیه DNA دو رشتهاي براي پایش دورهاي بالینی بیماران ضروري میباشد. زیرا افزایش تیتر آنتیبادي علیه DNA دو رشتهاي میتواند پیش بینی کننده شعله ور شدن بیماري باشد. از طرفی حضور آنتی بادي علیه DNA دو رشتهایی با نوع شدید بیماري همراه با درگیري کلیوي مرتبط میباشد و افزایش تیتر آنتیباديها ممکن است پیش بینی کننده عود بیماري باشد. آنتیباديهاي علیه DNA دو رشتهاي زیر کلاسهاي مختلفی دارند. اکثر آنتیبادي هاي پاتولوژیک در SLE از کلاس IgG میباشند. از این رو کیت الایزا anti dsDNA، براي سنجش کمی و نیمه کمی حضور آنتی بادیهاي IgG علیه عامل DNA دو رشته اي میتواند به عنوان یک ابزار کمک تشخیص در بیماران SLE همراه با سایر تظاهرات بالینی به کار رود.
.
اساس آزمایش:
.
اساس کیت الایزا anti dsDNA به روش الایزای غیرمستقیم (Indirect) میباشد. در این روش چاهکها توسط dsDNA خالص پوشش مییابند (Coating). براي کوتینگ از روش منحصر به فردي براي اتصال پایدار dsDNA به کف چاهک استفاده میشود تا از نتایج کاذب پرهیز شود. نمونههای رقیق شده بیماران به داخل چاهکها ریخته میشوند. درصورت وجود آنتیبادی علیه آنتیژنهای dsDNA، این آنتیبادیها به آنتیژنهای ته چاهک متصل میشوند.
پس از شستشو با افزودن آنتی بادي ضد IgG که به آنزیم HRP متصل شده، در صورت وجود آنتیبادیهاي ضد dsDNA از نوع IgG، آنتیبادي نشاندار نیز به آنها متصل میگردد. پس از شستشو، محلول رنگزا داخل چاهکها ریخته میشود. شدت رنگ آبی متناسب است با کمپلکس ایمنی که در چاهکها تشکیل میشود. با افزودن محلول متوقف کننده، رنگ آبی به زرد تبدیل میشود که بهترین جذب نوري را در طول موج 450 نانومتر دارد.
.
محتویات کیت:
.
- یک عدد پلیت داراي 96 عدد چاهک پوششی با آنتیژنهای dsDNA
- سري استانداردها (Standard Set): شامل 4 ویال 1 میلی لیتري از استاندارد با غلظتهاي 0‚ 100‚ 400‚ 800 IU/ml از dsDNA-Anti کالیبر در مقابل استاندارد مرجع 15/174 :NIBSC سازمان بهداشت جهانی (آماده براي مصرف-سبز رنگ)
- محلول آنزیم کنژوگه آمادهی مصرف (Enzyme Conjugate): یک ویال حاوي 12 میلیلیتر آنتیبادي ضد IgG انسانی متصل به آنزیم پراکسیداز.
- سرم کنترل بالا (High Control): یک ویال 1 میلیلیتري حاوي محلول بافري، داراي پروتئین به عنوان پایدار کننده و %0/05 کاتن به عنوان مادهی محافظ و سرم انسانی غیر فعال، حاوي آنتی بادي IgG علیه dsDNA (آمادهی مصرف-بنفش رنگ). غلظت دقیق کنترل مندرج روي ویال.
- سرم کنترل پایین (Low Control): یک ویال 1 میلی لیتري حاوي محلول داراي بافر فسفات و %0/05 کاتن به عنوان مادهی محافظ و سرم انسانی منفی از نظر آنتی بادي IgG علیه dsDNA (آمادهی مصرف- زرد رنگ)
- محلول رنگزاي یک مرحلهاي (Chromogen-Substrate): یک ویال حاوي 12 میلیلیتر تترا متیل بنزیدین و آب اکسیژنه (آمادهی مصرف)
- محلول شستشو (Wash Buffer): یک ویال حاوي 50 میلیلیتر محلول شستشوي غلیظ (10x) داراي محلول بافر فسفات و %0/05 تـوئین. جهـت تهیـه محلـول شستشوي آمادهی مصرف ، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت 1/10 رقیق نمایید.
- محلول متوقف کننده (Stop Solution): یک ویال حاوي 12 میلیلیتر اسید کلریدریک 1 نرمال.
.
شرایط نگهداری:
.
- کیت را در یخچال بین دماي 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداري نمایید.
- چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداري نمایید.
- پایداري محتویات کیت تا پایان مدت انقضاي مندرج بر روي هر یک از آنها میباشد.
.
نکات قابل ذکر برای مصرف کنندگان:
.
- محتویات این کیت تنها براي مصرف در همین کیت هستند.
- تمامی محتویات کیت تنها براي استفاده تشخیصی در آزمایشگاه میباشند .
- از مخلوط کردن محتویات کیت ها با شماره ساختهاي مختلف جداً خودداري نمایید .
- کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود HBsAg وآنتی بادیهاي HCV و HIV کنترل و فاقد این عوامل میباشند. جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار میکنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند و از وسایل ایمنی لازم در آزمایشگاه استفاده نمایند.
0دیدگاه کاربران