انجام PCR ژن‌های میکروبی

PCR یا Polymerase chain reaction (واکنش زنجیره‌ای پلیمراز) یکی از مهمترین تکنیک‌های آزمایشگاهی برای شناسایی میکروارگانیسم‌ها می‌باشد. در این روش با تشخیص ژن‌های مربوط به میکروارگانیسم مورد نظر (باکتری، ویروس و یا قارچ) به شناسایی میکروارگانیسم می‌پردازند. اساس این روش تولید میلیون‌ها تا میلیاردها نسخه کپی از ژنوم مورد بررسی (DNA) است. به این طریق DNA میکروارگانیسم را می‌توان با جزئیات بیشتر مطالعه کرد. برای مثال تشخیص جهش‌های موجود در ژنوم به این روش قابل بررسی است.

در PCR از قطعات کوتاه سنتز شده به نام پرایمر جهت انتخاب قسمتی از ژن استفاده می‌شود. پرایمر شروع رونویسی از قطعه DNA مورد نظر را برای تکثیر انجام می‌دهد. سپس کپی‌های بیشتر نیز از این قطعه‌ی ژن صورت میگیرد. شایان ذکر کیت‌های تشخیصی PCR نیز در این لینک در وبسایت ساینس بازار قابل خریداری می‌باشند.

.شرایط ثبت سفارش انجام PCR ژن‌های میکروبی

.شما پژوهشگر گرامی میتوانید با خرید انجام تست PCR ژن های میکروبی در هزینه های تحقیقاتی خود به علت هزینه های بسیار بالای مواد اولیه، در صرفه جویی نمایید. علاوه بر این انجام آزمایش مولکولی شما که نیازمند دقت بالا و عدم الودگی می باشد را به کارشناسان خبره ازمایشگاهی میکروب شناسی و ویروس شناسی می سپارید. در نتیجه دیگر نگران آلودگی کار، نتایج غیر معتبر و نادرست و همچنین تفسیرهای اشتباه نخواهید بود. تفسیر نتایج تست نیز خدمت شما قرار خواهد گرفت.

انجام تست PCR ژن‌های میکروبی به دو صورت امکان پذیر است. در حالت اول شما که شما پژوهشگر محترم خواستار چک شدن نتایج تست خود هستید میتوانید تمامی مواد اولیه خریداری خود را برای ساینس بازار ارسال نمایید تا این تست توسط کارشناسان با تجربه ما انجام گیرد. در حالت دوم شما میتوانید صفر تا صد تهیه مواد مورد نیاز pcr از قبیل مواد اولیه و تهیه پرایمر را به ما بسپارید که در این حالت قیمت نهایی بعد از محاسبه هزینه ها اعلام خواهد شد.

.کاربرد PCR: 

.شناسایی و تشخیص میکروارگانیسم بیماری زا

بررسی ژنوم با جزئیات و تشخیص هرگونه جهش در DNA

شناسایی ژن‌های مقاومت به آنتی بیوتیک‌ها

کاربرد در تحقیقات بیولوژی و مولکولی

.روش انجام PCR ژن‌های میکروبی:

.PCR به طور کلی مجموعه‌ای از چندین سیکل دمایی است. مراحل انجام واکنش PCR به شرح زیر است:

1. مرحله شروع (Initialization step)
2. دناتوره سازی (Denaturation)
3. مرحله اتصال (Annealing step)
4. مرحله گسترش یا طویل شدن (Extension/Elongation step)
5. طویل شدن نهایی( Final Elongation)

­.مرحله شروع (Initialization step)

.در این مرحله محفظه واکنش تا دمای 94 درجه سانتیگراد گرم می‌شود. این مرحله مختص DNA پلیمراز هایی می‌باشد که نیاز به مرحله گرم کردن یا Hot- start PCR دارند. این مرحله به طور روتین بین تا 1 تا 10 دقیقه به طول می‌انجامد.

.دناتوره سازی (Denaturation)

.در PCR هایی که نیاز به Hot- start PCR ندارند، این مرحله اولین مرحله از سیکل دمایی است. این مرحله شامل گرم کردن محفظه واکنش در دمای 94-98 درجه سانتیگراد (201-208 درجه فارنهایت) در مدت زمان 20-30 ثانیه است. نقش این سیکل دمایی در ذوب DNA یا شکستن الگوی DNA دو رشته‌ای با شکستن پیوندهای هیدروژنی بین بازهای مکمل است. به این طریق دو مولکول DNA تک رشته‌ای تولید می‌شود.

.مرحله اتصال (Annealing step)

.در سیکل دوم دمایی بایستی دمای واکنش به 50 تا 65 درجه سانتیگراد (122 تا 149 درجه فارنهایت) برسد. مدت زمان این سیکل 20 تا 40 ثانیه می‌باشد. نقش این سیکل دمایی این است که پرایمر به ژنوم مورد نظر (DNA) متصل شود. هر پرایمر برای مشخص نمودن قطعه اغاز رونویسی به یکی از قطعات DNA تک رشته‌ای متصل می‌شود. پرایمرها نوعی توالی DNA تک رشته‌ای کوتاه می‌باشند. این نوع پرایمرها پیش از انجام واکنش PCR به صورت مصنوعی و مطابق با توالی ژن DNA موردنظر طراحی و سنتز شده است. دو نوع پرایمر برای تکثیر ژن مورد نیاز است. پرایمر آغازگر Forward و پرایمر Reverse. این پرایمرها توالی کوتاهی در انتهای انتهای 3′ هر رشته تکمیل می‌کنند.

.مرحله گسترش یا طویل شدن (Extension/Elongation step)

.دما در این سیکل وابسته به نوع آنزیم DNA پلیمرازی است که در واکنش PCR مورد استفاده قرار می‌گیرد. دمای مناسب برای عملکرد Taq DNA پلیمراز در حدود 80-75 درجه سانتیگراد (167-176 درجه فارنهایت) می‌باشد. اگرچه عموما از دمای ۷۲ درجه‌ی سانتیگراد برای استفاده از این آنزیم در واکنش PCR کاربرد دارد. در این مرحله توسط پلیمراز، نوکلئوتیدهای مکمل بر اساس رشته الگو از ۵’ -۳’ در کنار هم قرار می‌گیرند. سپس با استفاده از رشته‌ی مکمل، رشته‌ی الگوی اولیه را تولید می‌کند. مدت زمان این مرحله به فعالیت DNA پلیمراز و طول رشته‌ی DNA الگو بستگی دارد. به عنوان یک قانون در درجه حرارت اپتیمم، پلیمراز بایستی ۱۰۰۰ نوکلئوتید در دقیقه را کپی کند. به این جهت چنانچه شرایط مناسب باشد و محدودیت سوبسترا نداشته باشیم، در هر مرحله گسترش، DNA دو برابر می‌شود.

.طویل شدن نهایی( Final Elongation):

این مرحله فقط یکبار و پس از آخرین سیکل PCR و در دمای ۷۴-۷۰ درجه انجام می‌شود. طول مدت زمان این سیکل دمایی بین ۱۵-۵ دقیقه انجام میشود. هدف از این سیکل حصول اطمینان از تبدیل همه DNAهای تک رشته‌ای به دورشته‌ای می‌باشد.

­گروه‌های هدف استفاده از خدمت:

­.کلیه گروه‌های پزشکی، پیراپزشکی و علوم پایه نظیر میکروب شناسی، ویروس شناسی، ایمونولوژی و ژنتیک می‌توانند با خرید انجام PCR ژن‌های میکروبی از این خدمت استفاده کنند. جهت تهیه سایر کیت‌های مولکولی و الایزا نیز می‌توانید به وبسایت ساینس بازار مراجعه فرمایید.