پلاسمید DR274

پلاسمید DR274 یک وکتور اختصاصی برای تولید مولکول‌های sgRNA است. با استفاده از این پلاسمید می‌توان مولکول‌های sgRNA را در شرایط آزمایشگاهی تولید کرد تا با تزریق به سلول‌های هدف (به همراه پروتئین یا mRNA کد کننده پروتئین Cas9) ژن‌های دلخواه را با کارایی بالا هدف‌گیری کرد.

فرایند کلی تولید مولکول‌ sgRNA با استفاده از این پلاسمید شامل طراحی توالی‌های sgRNA، سنتز توالی‌های sense و antisense کد کننده sgRNA (به همراه توالی‎‌های انتهای چسبان سازگار با انتهاهای پلاسمید)، هیبریداسیون این قطعات، اتصال مولکول دو رشته‌ای حاصل به پلاسمید DR274 خطی شده با آنزیم BsaI، و در نهایت in vitro transcription و تولید مولکول sgRNA می‌باشد.

این پلاسمید واجد مارکر مقاومت به کانامایسین است و در نتیجه باکتری E.Coli حاوی این پلاسمید را باید در محیط LB Agar حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین با غلظت 50 میکروگرم در هر میلی لیتر و در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت داد. سویه باکتری مناسب برای این وکتور XL1 Blue است.