پلاسمید pX458  که با نام pSpCas9(BB)-2A-GFP نیز شناخته می‌شود، امکان انتقال و بیان همزمان کاست بیان‌کننده spCas9 (تحت کنترل پروموتر Cbh) و توالی‌های sgRNA (تحت کنترل پروموتور U6) را فراهم می‌سازد.

این پلاسمید واجد توالی کد‌کننده GFP نیز می باشد که با واسطه توالی T2A به توالی spCas متصل بوده و تحت کنترل پروموتر CMV می‌باشد. پس از بیان توالی spCas-GFP با تجزیه توالی T2A این دو پروتئین از هم جداشده و spCas9 فعالیت نوکلئازی خود را ایفا می‌کند. این خصوصیت باعث کاهش طول پلاسمید به 9288 جفت باز شده‌است که انتقال پلاسمید به سلول هدف را تسهیل می‌کند.

مارکر GFP پایش ورود پلاسمید به سلول‌های هدف و همچنین جداسازی و تخلیص سلول‌های دریافت‌کننده پلاسمید را امکان پذیر می‌کند.

این پلاسمید واجد مارکر مقاومت به آمپی‌سیلین است و در نتیجه باکتری E.Coli حاوی این پلاسمید را باید در محیط LB Agar حاوی آنتی‌بیوتیک کانامایسین با غلظت 50-100 میکروگرم در هر میلی‌لیتر و در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت داد. سویه باکتری مناسب برای این وکتور XL1 Blue است.