انجام Real time PCR

.

انجام Real time PCR توسط کارشناسان با تجربه مستقر در مراکز تحقیقاتی دانشگاه علوم پزشکی انجام میشود.

Real-time PCR، همچنین به عنوان کمی PCR (qPCR) شناخته می شود، یک روش آزمایشگاهی است که برای تقویت و تعیین کمیت همزمان یک مولکول DNA هدف استفاده می شود. به طور گسترده در زمینه های مختلف از جمله زیست شناسی مولکولی، ژنتیک، تشخیص و پزشکی قانونی استفاده می شود.

.

.

معرفی تست Real time PCR

.

اصول Real-Time PCR : مانند PCR سنتی، Real-Time PCR شامل چرخه های مکرر دناتوراسیون (جداسازی رشته های DNA)، انلینگ (اتصال پرایمرها به توالی هدف) و گسترش (سنتز رشته های DNA جدید) است.

.

کمی سازی : Real-time PCR امکان تعیین کمیت DNA را در طول فرآیند تکثیر می دهد. این امر با استفاده از رنگ های فلورسنت یا پروب هایی که هنگام اتصال به DNA از خود فلورسانس ساطع می کنند به دست می آید.

.

روش های انجام  Real time PCR

.

– SYBR Green : رنگی که به DNA دو رشته ای متصل می شود و پس از اتصال فلورسانس از خود ساطع می کند. افزایش فلورسانس با مقدار DNA تولید شده متناسب است.

– TaqMan Probes : پروبهای الیگونوکلئوتیدی خاص هستند که حاوی یک رنگ گزارشگر فلورسنت و یک خاموش کننده هستند. هنگامی که پروب در طی تکثیر PCR شکافته می شود، رنگ گزارشگر آزاد می شود که منجر به افزایش فلورسانس می شود.

.

کاربرد Real time PCR

.

1. تحلیل بیان ژن : اندازه گیری سطوح mRNA برای مطالعه بیان ژن.
2. تشخیص پاتوژن : شناسایی و تعیین کمیت عوامل بیماری زا در نمونه های بالینی.
3. تحلیل تنوع ژنتیکی : ارزیابی پلی مورفیسم ها و جهش های ژنتیکی.
4. تغییر تعداد کپی : تعیین کمیت تعداد کپی های یک توالی DNA خاص.
5. پایش محیطی : تشخیص میکروارگانیسم های خاص در نمونه های محیطی.

.

مزایای استفاده از روش Real time PCR

.

• حساسیت : می تواند سطوح پایین DNA را تشخیص دهد.
• ویژگی : ویژگی بالا به دلیل استفاده از پرایمرها و پروب های خاص.
• سرعت : نتایج را در چند ساعت ارائه می دهد.
• داده های کمی : داده های کمی را به جای نتایج کیفی تولید می کند.
• خطر آلودگی : حساسیت بالا آن را مستعد آلودگی می کند.