تست توکسین زایی باکتری Bacterial toxicity test

تست توکسین زایی باکتری Bacterial toxicity test

نگاهي كلي بر روش هاي سنجش توكسين ها

1- روش هاي زيستى:

روش هاي تشــخيصى پيشــرفته، روشهايي سريع، آســان و دقيق ميباشــند ولي اين روشها بر خلاف روشهاي زيســتى اطلاعاتي راجع به فعاليت زيستى توكسين ها فراهم نمي آورند، از اين رو روش هاي بيولوژيك هنوز هم امروزه جهت تشــخيص بعضي از ســموم بعنوان
اســتاندارد طلايى مدنظر ميباشند. اين روش ها بيشتر بر پايه تزريق و بررســي فعاليت ســموم در حيوانات مختلف آزمايشگاهي از جمله مــوش، ميمون، خرگوش و يا خوكچه هندي مى باشــند. روش هاي مبتني بر كشت ســلولي و بررسي فعاليت توكسين در سلول ها نيز از
روشهاى زيستى است كه در مقياس وسيعي مورد استفاده ميباشد.

2- روش هاي ايمونولوژي:

اين روش ها بســيار ساده تر و ارزان تر از روش هاي زيستى هستند و در مقياس وســيعي مورد اســتفاده قرار ميگيرند. مهمترين اين روش ها شامل موارد زير است:

روش هاي انتشار در ژل

ايــن روش ها يكي از اولين روشهاي ايمونولوژيك مورد اســتفاده و شامل انتشار يك طرفه، 2 طرفه و روش هاي ميكرو اسلايد مي باشند. جهت انجام اين آزمايش ها، فراهم كردن آنتي ژن در شــكل رســوب جزء ضروري و مهم ميباشد. از ميان اين روش ها، متد اوچترلوني از بقيه بيشتر مورد استفاده قرار گرفته است. اين تكنيك جهت شناسايي سموم مختلف از جمله سموم استافيلوكوكي كاربرد داشته است. اين تكنيك حساســيت تشــخيصي در حدود 0/1 تا 0/01 ميكروگرم در ميليليتر را در مورد سموم اســتافيلوكوكي دارد ولي از طرفي تفسير نتايج آن مشكل مى باشد. ايجاد واكنش هاي غيراختصاصي از ديگر مشكلات اين تكنيك ميباشد.

سنجش به روش هماگلوتيناسيون

روش هاى مبتنى برهماگلوتيناسيون به مراتب حساس تراز روش هاي سنجش انتشار در ژل ميباشند. بر خلاف روش هاي انتشار در ژل، نيازي به فرم قابل رســوب آنتي ژن نميباشد. در هماگلوتيناسيون معكوس، اريتروسيت هاي پوشيده شده با توكسين به واكنش اضافه مىگردد و در صورت آزاد بودن آنتي بادي ها، آگلوتيناسيون رخ ميدهد. در آزمون آگلوتيناسيون معكوس، آنتي بادي با اريتروسيت هاي گوسفند متصل مىگردد و هنگامي كه توكســين موجود اســت، با آن آگلوتيناسيون ايجاد مى كند.

كواگلوتيناسيون

در ايــن روش آنتي بــادي عليــه توكســين بــا پروتئيــن A باكتري اســتافيلوكوكوس اورئوس باند ميشــود. پروتئين A به قسمت Fc آنتي بادي متصل شــده و قســمت Fab آنتي بادي آزادانه در سطح پروتئين A عرضه ميشود.

آگلوتيناسيون ذرات لاتكس غير فعال و معكوس

ايــن روش براي شناســايي آنتي ژن هــاي محلــول در عصاره هاي غذايي و يا كشــت سلولي مورد اســتفاده قرار ميگيرد. در روش هاي آگلوتيناســيون سنتي، آنتي بادي محلول با آنتي ژن واكنش مي دهد اما در آگلوتيناســيون ذرات لاتكس غير فعال و معكوس، آنتي بادي ها به
ذرات لاتكس متصل مىگردد و با آنتي ژن محلول واكنش ميدهند. در اين روش رقت هاي متوالي از نمونه تهيه شــده و با مقدار ثابتي از آنتى بادى متصل شده به ذرات لاتكس سنجيده ميشود.

ايمونوالكتروفورز

اين روش برپايــه واكنش آنتي بادي هاي اختصاصي توليد شــده عليه توكسين هاي مختلف ميباشد. كاربردي ترين روش هاي مبتني بر اين اســاس، كانتر ايمونوالكتروفورز و راكت ايمونوالكتروفورز ميباشــند.
اين تكنيك ها روش ــهايي حســاس جهت شناســايي توكســين هاي مختلف از جمله توكســين هاي اســتافيلوكوكي، توكسين بوتولينوم و غيره مى باشند.