تست توکسین زایی باکتری Bacterial toxicity test
خدمات سفارش انجام تست های میکروبی نظیر انجام تست توکسین زایی باکتری توسط کارشناسان میکروبی ساینس بازار به پژوهشگران محترم ارائه میشود. در اینجا نگاهي كلي بر روش هاي سنجش توكسين ها در رابطه با تست توکسین زایی باکتری داریم:
1- روش هاي زيستى در تست توکسین زایی باکتری:
روش هاي تشــخيصى پيشــرفته، روشهايي سريع، آســان و دقيق ميباشــند ولي اين روشها بر خلاف روشهاي زيســتى اطلاعاتي راجع به فعاليت زيستى توكسين ها فراهم نمي آورند، از اين رو روش هاي بيولوژيك هنوز هم امروزه جهت تشــخيص بعضي از ســموم بعنوان اســتاندارد طلايى مدنظر ميباشند. اين روش ها بيشتر بر پايه تزريق و بررســي فعاليت ســموم در حيوانات مختلف آزمايشگاهي از جمله مــوش، ميمون، خرگوش و يا خوكچه هندي مى باشــند.
روش هاي مبتني بر كشت ســلولي و بررسي فعاليت توكسين در سلول ها (اثر سیتوپاتیک روی کشت سلولی) نيز از روش هاى زيستى است كه در مقياس وسيعي مورد استفاده ميباشد. در این روش به مشاهده تخریب یا تغییر مورفولوژی سلولها پرداخته میشود. برای مثال تست توکسین زایی باکتری Clostridioides difficile
2- روش هاي ايمونولوژي در تست توکسین زایی باکتری:
اين روش ها بســيار ساده تر و ارزان تر از روش هاي زيستى هستند و در مقياس وســيعي مورد اســتفاده قرار ميگيرند. مهمترين اين روش ها شامل موارد زير است:
روش هاي انتشار در ژل
ايــن روش ها يكي از اولين روشهاي ايمونولوژيك مورد اســتفاده و شامل انتشار يك طرفه، 2 طرفه و روش هاي ميكرو اسلايد مي باشند. جهت انجام اين آزمايش ها، فراهم كردن آنتي ژن در شــكل رســوب جزء ضروري و مهم ميباشد. از ميان اين روش ها، متد اوچترلوني از بقيه بيشتر مورد استفاده قرار گرفته است. اين تكنيك جهت شناسايي سموم مختلف از جمله سموم استافيلوكوكي كاربرد داشته است. اين تكنيك حساســيت تشــخيصي در حدود 0/1 تا 0/01 ميكروگرم در ميليليتر را در مورد سموم اســتافيلوكوكي دارد ولي از طرفي تفسير نتايج آن مشكل مى باشد. ايجاد واكنش هاي غيراختصاصي از ديگر مشكلات اين تكنيك ميباشد.
سنجش به روش هماگلوتيناسيون
روش هاى مبتنى برهماگلوتيناسيون به مراتب حساس تراز روش هاي سنجش انتشار در ژل ميباشند. بر خلاف روش هاي انتشار در ژل، نيازي به فرم قابل رســوب آنتي ژن نميباشد. در هماگلوتيناسيون معكوس، اريتروسيت هاي پوشيده شده با توكسين به واكنش اضافه مىگردد و در صورت آزاد بودن آنتي بادي ها، آگلوتيناسيون رخ ميدهد. در آزمون آگلوتيناسيون معكوس، آنتي بادي با اريتروسيت هاي گوسفند متصل مىگردد و هنگامي كه توكســين موجود اســت، با آن آگلوتيناسيون ايجاد مى كند.
كواگلوتيناسيون
در ايــن روش آنتي بــادي عليــه توكســين بــا پروتئيــن A باكتري اســتافيلوكوكوس اورئوس باند ميشــود. پروتئين A به قسمت Fc آنتي بادي متصل شــده و قســمت Fab آنتي بادي آزادانه در سطح پروتئين A عرضه ميشود.
آگلوتيناسيون ذرات لاتكس غير فعال و معكوس
ايــن روش براي شناســايي آنتي ژن هــاي محلــول در عصاره هاي غذايي و يا كشــت سلولي مورد اســتفاده قرار ميگيرد. در روش هاي آگلوتيناســيون سنتي، آنتي بادي محلول با آنتي ژن واكنش مي دهد اما در آگلوتيناســيون ذرات لاتكس غير فعال و معكوس، آنتي بادي ها به
ذرات لاتكس متصل مىگردد و با آنتي ژن محلول واكنش ميدهند. در اين روش رقت هاي متوالي از نمونه تهيه شــده و با مقدار ثابتي از آنتى بادى متصل شده به ذرات لاتكس سنجيده ميشود.
ايمونوالكتروفورز
اين روش برپايــه واكنش آنتي بادي هاي اختصاصي توليد شــده عليه توكسين هاي مختلف ميباشد. كاربردي ترين روش هاي مبتني بر اين اســاس، كانتر ايمونوالكتروفورز و راكت ايمونوالكتروفورز ميباشــند.
اين تكنيك ها روش هايي حســاس جهت شناســايي توكســين هاي مختلف از جمله توكســين هاي اســتافيلوكوكي، توكسين بوتولينوم و غيره مى باشند.
خدمات سفارش انجام تست های میکروبی نظیر انجام تست توکسین زایی باکتری توسط کارشناسان میکروبی ساینس بازار به پژوهشگران محترم ارائه میشود.
تست توکسینزایی باکتریها برای بررسی توانایی یک باکتری در تولید سم (toxins) انجام میشود و بسته به نوع باکتری و سم، روشهای مختلفی دارد. بهطور خلاصه:
3- روشهای مولکولی در تست توکسین زایی باکتری
- PCR / Real-time PCR برای شناسایی ژنهای توکسین
- مثالها:
- tox در Corynebacterium diphtheriae
- ctx در Vibrio cholerae
- tcdA/tcdB در C. difficile
مزیت: بسیار حساس و اختصاصی
عیب: وجود ژن ≠ تولید فعال سم
4- تستهای اختصاصی کلاسیک
- تست الک (Elek test)
- برای اثبات تولید سم دیفتری (رسوب آنتیژن–آنتیبادی روی محیط)
5- روشهای نوین
- Lateral flow assays (کیتهای سریع)
- Mass spectrometry (در مراکز پیشرفته)
جمعبندی
- اگر هدف تشخیص سریع بالینی است → ELISA یا PCR
- اگر هدف اثبات عملکرد سم است → کشت سلولی یا In vivo
- اگر هدف غربالگری ژنی است → PCR
جهت ثبت سفارش انجام تست توکسین زایی باکتری با کارشناسان فنی ساینس بازار با شماره تماس 09351245541 تماس بگیرید. شما پژوهشگر محترم میتوانید انجام تست توکسین زایی باکتری را در کنار منتور پژوهشی متخصص ازمایشگاهی بگذرانید.
