محصول کیت آزمایشگاهی الایزا هپاتیت B

.کیت الایزای HBs Ag جهت شناسایی عامل بیماري ویروس هپاتیت B از خانواده هپادنا ویریده می‌باشد. این ویروس داراي ژنوم DNA نیمه دو رشته‌اي و حلقوي می‌باشد. این ویروس داراي 8 ژنوتیپ بوده و 9 تیپ سرولوژیک بنام زیر نوع براي آن وجود دارد. زیر نوع‌ها داراي یک شاخص آنتی ژنی مشترك بنام a بوده و بر اساس نوع اسید آمینه موجود در دو محل 122 و 166 در ترکیب با چهار شاخص آنتی ژنیک دیگر تقسیم بندي می‌شوند. ژنوتیپ D شایعترین ژنوتیپ در ایران می‌باشد (زیر نوع هاي 2ayw-ayw3-ayw)

در جریان خون، ویروس هپاتیت B به شکل ساختمان‌هاي کروي شکل بنام پارتیکل Dane وجود دارد که حاوي یک پوشش و یک حفره مرکزي از پروتئین‌هاي نوکلئو کپسید است. اولین شاخص عفونت هپاتیت B آنتی ژن سطحی یا HBsAg است. این آنتی ژن براي یک دوره زمانی دو تا دوازده هفته‌اي پس از تماس با ویروس و قبل از پدیدار شدن شواهد بیوشیمیایی درگیري کبد در خون وجود دارد. ممکن است در این دوره فرد مبتلا فاقد علائم بالینی باشد. در این دوره با روش‌هاي حساس
وجود آنتی ژن در جریان خون قابل رد یابی است.

در بیمارانی که از بیماري بهبود می یابند HBsAg در طی مدت 20 – 12 هفته پس از شروع علائم بالینی و یا افزایش مقدار
آنزیمهاي اختصاصی کبد از جریان خون حذف می‌شود. پایداري آنتی ژن در جریان خون به مدت بیشتر از شش ماه وضعیتی بنام حامل مزمن را ایجاد می‌کند. HBsAg یک شاخص عفونت هپاتیت B است که نقش اساسی را در تشخیص عفونت حاد و شناسائی موارد مزمن به عهده دارد. کیت الایزای HBs Ag موجود توانائی تشخیص HBsAg را با حساسیت و ویژگی مناسب در نمونه هاي سرم و پلاسما دارد .

.اساس آزمایش:

.اساس آزمایش کیت الایزای HBs Ag بر روش Sandwich Enzyme Immunoassay دو مرحله‌اي استوار است. در مرحله اول Ag HBs موجود در نمونه بطور همزمان با آنتی بادي‌هاي منوکلونال و پلی کلونال کوت شده در چاهک‌ها و آنتی‌بادي ضد HBsAg نشاندار شده با بیوتین (کنژوگه 1) واکنش می‌دهد. پس از طی زمان انکوباسیون در مرحله دوم با افزودن کنژوگه حاوي کمپلکس استرپتاویدین- پراکسیداز (کنژوگه 2) استرپتاویدین به بیوتین موجود در کنژوگه اول متصل می گردد.

پس از انکوباسیون و شستشو محلول سوبسترا و کروموژن به چاهکها اضافه می شود. رنگ آبی بعد از این مرحله نتیجه تجزیه سوبسترا در اثر فعالیت آنزیم و تغییر رنگ محلول کروموژن ناشی از این واکنش است. شدت این رنگ متناسب با تعداد کمپلکس‌هاي ایمنی ایجاد شده در چاهک‌ها می‌باشد. با افزودن محلول متوقف کننده، رنگ آبی به زرد تبدیل می‌شود که بهترین جذب نوري را در طول موج 450 نانومتر دارد.

.محتویات کیت:

.

• پلیت 96 خانه‌ای حاوي چاهک‌هايی با پوشش دو آنتی‌بادي منوکلونال و پلی کلونال علیه HBs Ag
• محلول کونژوگه 1 Conjugate: آنتی‌بادي منوکلونال نشاندار با بیوتین در محلول بافري به رنگ قرمز حاوي پروتئین و نگهدارنده، یک ویال حاوي 3/5 میلی لیتر محلول
• محلول کونژوگه 2 Conjugate: استرپتاویدین – پراکسیداز در محلول بافري به رنگ آبی حاوي پروتئین و نگهدارنده. یک ویال حاوي 3/5 میلی لیتر محلول
• سرم کنترل مثبت (Positive Control): یک ویال حاوي ml 2 محلول بافري بنفش رنگ، داراي پروتئین به عنوان پایدار کننده و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ و سرم انسانی غیر فعال، حاوي آنتی‌بادي علیه HBs Ag
• سرم کنترل منفی (Negative Control): یک ویال حاوي ml 3 محلول زرد رنگ و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ و سرم انسانی منفی از نظر HBs Ag
• محلول رنگزاي یک مرحله اي (Chromogen-substrate): ویال حاوي 12 میلی‌لیتر تترا متیل بنزیدین و آب اکسیژنه.
• محلول شستشو: یک ویال حاوي 50 میلی لیتر محلول شستشوي غلیظ (10x) محتوي محلول بافر فسفات و %0/05 توئین. جهت تهیه محلول شستشوي برای مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت 1/20 رقیق نمایید.
• محلول متوقف کننده (Stop Sloution): یک ویال حاوي 6 میلی‌لیتر اسید کلریدریک 1 نرمال .
• برچسب مخصوص پلیت .

.شرایط نگهداری:

.

1. کیت کیت الایزای HBs Ag را در یخچال بین دماي 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداري نمایید .
2. چاهک‌ها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداري نمایید .
3. پایداري محتویات کیت (قبل از باز شدن درب کیت) تا پایان مدت انقضاء درج شده بر روي هر یک از آنها می باشد .
4. محلول شستشو را به نسبت 1/10 با آب مقطر رقیق نمایید. این محلول به مدت یک هفته در شرایط 8 – 2 درجه سانتیگراد قابل نگهداري و مصرف می‌باشد. (ممکن است در محلول شستشوي غلیظ کریستال تشکیل شود که این امر مشکلی را ایجاد نمی‌نماید. قبل از تهیه محلول شستشوي کار براي حل شدن کریستالها ویال را در 37 درجه سانتی‌گراد قرار دهید.)

.نکات قابل ذکر برای مصرف کنندگان:

.

• محتویات این کیت تنها براي مصرف در همین کیت قابل استفاده هستند .
• این کیت صرفا جهت تعیین HBsAg در سرم و پلاسماي انسانی است. از مخلوط کردن نمونه ها ي سرم پرهیز نمایید.
• از مخلوط کردن محتویات کیت‌ها با شماره ساختهاي مختلف جداً خودداري نمایید.
• کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود آنتی ژن HIV و آنتی بادی‌هاي HIV و HCV کنترل گردیده و فاقد این عوامل می‌باشند. جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار می‌کنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند .
• هنگام انجام آزمایش حتماً از دستکش‌هاي یکبار مصرف استفاده کنید. همچنین استفاده از عینک‌هاي آزمایشگاهی هنگام کار با سرم‌هاي بیماران توصیه می‌شود.
• سرم‌هاي مثبت از نظر HBsAg، وسایل و محلول‌هاي شستشو مشکوك به آلودگی را بعد از اتمام کار به مدت حداقل30 دقیقه در مجاورت محلول هیپوکلریت سدیم %5 یا محلول‌هاي مناسب ضد عفونی کننده دیگر قرار دهید. همچنین اتوکلاو کردن به مدت 20 دقیقه در 121 درجه سانتی گراد نیز پیشنهاد می‌گردد.