محصول کیت آزمایشگاهی الایزا هپاتیت B

.کیت الایزای HBs Ab جهت شناسایی عفونت هپاتیت B مورد استفاده قرار می‌گیرد. این عفونت در اثر ویروسی (HBV) از خانواده هپادنا ویریده که حاوي ژنوم DNA حلقوي است ایجاد می‌شود. HBsAg لیپوپروتئین سطح ویروس هپاتیت B می‌باشد.

در بین آنتی ژن‌هاي سطحی، شاخص a (اسید آمینه -147 124) هدف مهم در پاسخ ایمنی همورال است. اندازه‌گیري آنتی‌بادي علیه این آنتی‌ژن به عنوان شاخص مصونیت مورد استفاده قرار می‌گیرد. از نقطه نظر بیولوژیک پاکسازي ویروس بطور کلاسیک بوسیله ظهور آنتی‌بادي (Anti-HBs) علیه آنتی‌ژن استرالیایی (Ag HBs) در پروفایل سرولوژیک مشخص می‌شود. افرادي که به صورت حامل مزمن ویروس می‌باشند آنتی ژن ویروس را براي سال‌ها در سرم خود دارند ولی آنتی‌بادي ضد HBs در آنها ظاهر نمی‌شود.

وجود آنتی بادي دلیل بر روبرو شدن قبلی با عفونت، بهبودي و یا ایجاد ایمنی علیه هپاتیت B به وسیله واکسیناسیون می‌باشد. در کسانی که به هپاتیت B مبتلا شده اند Anti-HBs معمولا در پایان دوره پنجره اي (Window Period) و متعاقب پاك شدن سرم از HBsAg در خون ظاهر می‌شود و تیتر آن تا سال‌ها بالا می‌ماند. عدم تولید Anti-HBs پس از دوره پنجره‌اي موید ابتلاي فرد به فرم مزمن بیماري است که این اتفاق تقریبا˝ در %5 از مبتلایان بوقوع می پیوندد.

.اساس آزمایش:

.اساس آزمایش در کیت الایزای HBs Ab بر روش Immunoassay Enzyme Sandwich Antigen استوار می‌باشد. چاهک‌هاي پلیت با آنتی ژن‌هاي نوترکیب HBs (زیر نوع‌هاي ad و ay) پوشش می‌یابند. در هنگام آزمایش، پس از افزودن سرم، در صورت وجود آنتی‌بادی‌هاي اختصاصی علیه آنتی‌ژن‌هاي HBs ( آنتی بادی IgA-IgG-IgM)، آنتی‌بادی‌ها از طریق یک
Fab به آنتی ژن‌هاي کف چاهک متصل می‌شوند.

پس از انکوباسیون و شستشو ، محلول آنزیم کونژوگه کیت الایزای HBs Ab که حاوي آنتی ژن‌هاي HBs، نشاندار با آنزیم HRP می‌باشد به چاهک‌ها اضافه می‌شود. این آنتی‌ژن‌هاي کونژوگه به صورت اختصاصی به Fab آزاد آنتی‌بادی‌هاي اتصال یافته به کف چاهک متصل شده و ایجاد کمپلکس می‌نمایند. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول سوبسترا و کروموژن به چاهک‌ها اضافه می‌شود. رنگ آبی ایجاد شده بعد از این مرحله نتیجه تجزیه سوبسترا در اثر فعالیت آنزیم و تغییر رنگ محلول کروموژن ناشی از این واکنش می‌باشد . شدت این رنگ متناسب با تعداد کمپلکس‌هاي ایمنی ایجاد شده در چاهک‌ها است. با افزودن محلول متوقف کننده رنگ آبی به زرد تبدیل می‌شود که بهترین جذب نوري را در طول موج 450 نانومتر دارد.

.محتویات کیت:

.پلیت 96 خانه‌ای حاوي چاهک‌هاي پوششی با آنتی‌ژن‌هاي اختصاصی HBs.

محلول آنزیم کونژوگه آماده‌ی مصرف (Enzyme Conjugate Ready to Use): یک ویال حاوي 12 میلی‌لیتر آنتی ژن HBs متصل به آنزیم پراکسیداز در محلول بافري حاوي پروتئین و نگهدارنده.

سري استانداردها (Standards set): 5 ویال استاندارد شامل غلظت‌هاي صفر، 10 ، 50 ، 100 و 200ml/mIU از آنتی‌بادي ضد HBs کالیبره شده در برابر استاندارد WHO (هر ویال استاندارد حاوي 1/5 میلی لیتر می‌باشد) .

سرم کنترل (Serum Control): یک ویال حاوي 1/5 میلی لیتر سرم کنترل با غلظت مشخص مندرج بر روي برچسب ویال.

محلول رنگزاي یک مرحله اي (Chromogen-Substrate): 1 ویال حاوي 12 میلی لیتر (آماده‌ی مصرف) .

محلول شستشو (Wash Solution): یک ویال حاوي 50 میلی لیتر محلول شستشوي غلیظ (20X). جهت تهیه محلول شستشوي آماده‌ی مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت 1/20رقیق نمایید.

محلول متوقف کننده (Solution Stop) : یک ویال حاوي 12میلی لیتر اسید کلریدریک 1 نرمال .

برچسب مخصوص پلیت .

.شرایط نگهداری:

.

1. کیت را در یخچال بین دماي 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداري نمایید .
2. چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداري نمایید. پایداري پلیت بعد از باز کردن آن 4 ماه میباشد
3. پایداري محتویات کیت (قبل از باز شدن درب کیت) تا پایان مدت انقضاء نوشته شده بر روي هر یک از آنها می باشد . توصیه میشود بعد از باز کردن کیت حداکثر در فاصله زمانی 4 ماه از آن استفاده نمایید .
4. محلول شستشوي آماده‌ی مصرف که به نسبت 1/20 رقیق می‌باشد به مدت یک هفته در شرایط 8 – 2 درجه سانتی گراد قابل نگهداري و مصرف می‌باشد.

.

نکات قابل ذکر برای مصرف کنندگان:

.

• محتویات این کیت براي مصرف در همین کیت می باشند .
• این کیت صرفا جهت اندازه گیري HBs-Anti در سرم و پلاسماي انسانی طراحی و ساخته شده است .
• از مخلوط کردن محتویات کیتها با شماره ساختهاي مختلف جداً خودداري نمایید .
•  کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود آنتی ژنهاي HBs وHIV و آنتی‌بادی‌هاي HIV و HCV کنترل و فاقد این عوامل می‌باشند (غیر فعال سازي سرم یا پلاسما بمدت نیم ساعت در 56 درجه سانتی گراد انجام گرفته است). جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار می کنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند .
• هنگام انجام آزمایش حتماً از دستکش‌هاي یکبار مصرف استفاده کنید. همچنین استفاده از عینکهاي آزمایشگاهی هنگام کار با سرمهاي بیماران توصیه می شود .
• سرمهاي مثبت از نظر آنتی بادیهاي ضد HBs، وسایل و محلول‌هاي wash مشکوك به آلودگی را بعد از اتمام کار حداقل به مدت 30 دقیقه درون محلول هیپوکلریت سدیم %5 یا محلول‌هاي مناسب ضد عفونی کننده دیگر قراردهید . همچنین اتوکلاو کردن ، به مدت 15 دقیقه در 121 درجه پیشنهاد می‌گردد .