انجام تست آنتی بیوگرام | تست حساسیت میکروبی | دیسک دفیوژن | کربی بائر

انجام تست آنتی بیوگرام یا تعیین حساسیت میکروبی 

انتست آنتی بیوگرام یا تعیین حساسیت میکروبی به انتی بیوتیک، به بررسی میزان حساسیت یک میکروارگانیسم خاص (یک سویه باکتریایی) به آنتی­‌بیوتیک­‌های مختلف می­‌پردازد. در آزمایشگاه‌های تشخیص طبی به کمک آزمون تعیین حساسیت دارویی، بهترین آنتی­‌بیوتیک از بین طیف وسیعی از آنتی‌­بیوتیک­‌ها جهت درمان عفونت باکتریایی، انتخاب می­­‌شود. آنتی‌­بیوتیک­‌ها عموما در دو دسته باکتری‌­کش یا باکتریوسایدال (آمینوگلیکوزیدها، بتالاکتام­‌ها، گلیکوپپتیدها و…) و مهارکننده رشد باکتری یا باکتریواستاتیک (ماکرولیدها، تتراسایکلین، کلیندامایسین، کلرامفنیکل و …) طبقه‌­بندی می­‌شوند.

 از سویی دیگر به منظور ارزیابی عملکرد یک داروی مناسب یا ماده ضدمیکروبی تولید شده بایستی طیف فعالیت ضد میکروبی ماده مورد نظر در شرایط in vitro بررسی گردد. از این­‌رو با بکارگیری روش آنتی­‌بیوگرام و تست حساسیت میکروبی می­توان به بررسی میزان اثربخشی دارو علیه عامل میکروبی پی­‌برد.

پژوهشگران، دانشجویان و اساتید می توانند با خرید انجام تست آنتی بیوگرام یا تست حساسیت میکروبی به انتی بیوتیک (بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی) که در مراکز آزمایشگاهی تحت نظارت ساینس بازار انجام میشود، انجام بخش عملی و ازمایشگاهی پایان نامه های خود را به ما بسپارند.

.نمونه‌های مورد نیاز :

.آنتی‌بیوگرام و تعیین حساسیت میکروبی با تمامی نمونه‌های گرفته شده از بیمار از جمله ادرار، مدفوع، خون، CSF و خلط قابل انجام می‌باشد.

روش کار :

.روش‌­های مختلفی جهت انجام تست آنتی‌بیوگرام و تعیین حساسیت میکروبی مورد استفاده قرار می­‌گیرد از جمله:

• روش انتشار دیسک (Disk diffusion) یا کربی بائر (Kirby Bauer)
• E-test
• براث میکرودایلوشن (Broth micro-dilution MIC)

.1-روش انتشار دیسک در آگار یا تست دیسک دیفیوژن (Disk diffusion)

.در این آزمایش آنتی بیوگرام، سطح پلیت حاوی محیط کشت مولر هیلتون آگار را به شکل یکنواخت با ایزوله باکتریایی (غلظت 0.5 مک­‌فارلند) کشت می­‌دهیم. سپس دیسک‌­های هم اندازه آغشته به غلظت­‌های معین از آنتی­‌بیوتیک‌­ها با فاصله مشخص از یکدیگر (حداقل فاصله بین دیسک‌­ها 30mm و حداقل فاصله از لبه پلیت mm 15) را بر روی محیط کشت قرار می­‎‌دهیم. پس از گذشت زمان انکوباسیون (24ساعت نگهداری در دمای 37 درجه)، آنتی‌بیوتیک در ناحیه اطراف هر دیسک انتشار می‌یابد و یک ناحیه شفاف گرد (جایی که رشد سویه مهار می­‌شود) ظاهر می­‌شود. حضور یا عدم حضور هاله‌ی رشد اطراف دیسک آنتی بیوتیک، حساسیت میکروبی را تعیین می‌کند.

.2- روش E-test  

.این روش تست حساسیت میکروبی، حداقل غلظت مهاری آنتی بیوتیک (Minimal inhibitory concentration; MIC) را مورد برررسی قرار می‌­دهد. در این نوع از آنتی‌بیوگرام، یک

نوار آغشته به گرادیانی از غلظت‌های مختلف یک آنتی‌­بیوتیک، از غلظت کمتر به بالاتر در دو سوی نوار، جهت تعیین MIC مورد استفاده قرار می­‌گیرد. از آنتی­‌بیوتیک­‌هایی که اغلب به روش آنتی‌­بیوگرام E-test مورد ارزیابی قرار می­‌گیرند می­توان به ونکومایسین، کلیستین و ایمی‌­پنم اشاره کرد.

.3- روش براث میکرودایلوشن

.در این روش، آنتی‌بیوگرام و تعیین حساسیت میکروبی در مقیاس کوچک‌تر و در پلیت­‌های کشت 96 خانه­‌ای صورت می­‌گیرد بطوریکه با تهیه رقت­‌های متفاوت از آنتی‌بیوتیک (برای مثال 2، 4، 8، 16، 32 و 64 میکروگرم بر میلی‌لیتر) در محیط کشت مایع، تست تعیین حساسیت میکروبی انجام می­‌شود.

.تفسیر نتایج آنتی بیوگرام:

.نتایج تست ­آنتی‌بیوگرام و تعیین حساسیت میکروبی منطبق بر استانداردهای به روز CLSI (موسسه استانداردهای آزمایشگاهی و بالینی) گزارش خواهد شد. در روش دیسک دیفیوژن و E-test اندازه­‌گیری دقیق قطر هاله‌­ی عدم رشد باکتری اطراف دیسک آنتی‌­بیوتیکی، حساسیت و یا مقاومت سویه باکتریایی را تعیین می‌­کند. در روش میکرودایلوشن حداقل غلظت مهارکنندگی رشد گزارش خواهد شد.