کیت آزمایشگاهی الایزا هپاتیت سی

.

معرفی محصول:

.

کیت الایزای HCV Ab جهت سنجش ویروس هپاتیت سی (HCV) از خانواده فلاوي ویریده می‌باشد که عامل هپاتیت با قابلیت انتقال از طریق خون است. قبل از کشف این ویروس، عامل ایجاد کننده این نوع هپاتیت را nonB-nonA می‌نامیدند. ژنوم این ویروس شامل یک RNA تک رشته‌اي با حدود 10000 نوکلئوتید به همراه یک کپسید، یک ماتریکس و یک غلاف می‌باشد. این ویروس یک پیش‌ساز پلی پروتئینی را کد می‌کند. این پیش‌ساز به 3 بخش ساختمانی 2E 1,E, Core و -6 4 بخش غیر ساختاري پروتئینی 5NS , 4NS , 3NS , 2NS 1,NS تقسیم می‌شود. از لحاظ ژنتیکی ویروس هپاتیت C به شش ژنوتیپ اصلی (ماژور) و حداقل 80 زیر گونه تقسیم می‌شود. مطابق مطالعات انجام شده ژنوتیپ‌هاي شایع در ایران به ترتیب a1 و a3 و b1 و 4 بوده و میزان ابتلا به این عفونت در ایران در حدود %1 جمعیت می‌باشد.

از میان روشهایی که امروزه براي تشخیص این بیماري کاربرد دارند، روش الایزا از حساسیت بالایی برخوردار بوده و جهت بررسی اولیه و آزمایش غربالگري از آن استفاده می شود. نمونه هاي مثبت با این روش، بایستی با روش تاییدي blot Western مجدداً آزمایش شده و بررسی گردند. کیت حاضر از نسل سوم الایزا با حساسیت و اختصاصیت بالا بوده و قابلیت اندازه گیري آنتی بادي اختصاصی علیه HCV را دارا می باشد .

.

اساس آزمایش:

.

اساس آزمایش در این کیت بر روش Immunoassay Enzyme Indirect استوار است. چاهک‌هاي پلیت با آنتی‌ژن‌هاي نوترکیب CORE , 5NS , 4NS , 3NS مربوط به HCV پوشش می‌یابند، در هنگام آزمایش، پس از افزودن سرم، در صورت وجود آنتی‌بادی‌هاي اختصاصی علیه هپاتیت سی (IgG-IgM) آنتی بادی‌ها از طریق Fab به آنتی ژن‌هاي کف چاهک متصل می‌شوند. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول آنزیم کونژوگه که حاوي آنتی ‌هیومن آنتی بادي نشاندار با آنزیم HRP می‌باشد به چاهک‌ها اضافه می‌شود. آنتی هیومن آنتی بادي کونژوگه به صورت اختصاصی به قسمت Fc آنتی بادی‌هاي متصل شده به آنتی ژن‌هاي کف چاهک اتصال می‌یابد و ایجاد کمپلکس می‌نماید.

پس از انکوباسیون و شستشو، محلول سوبسترا و کروموژن به چاهک‌ها اضافه می‌شود. رنگ آبی ایجاد شده بعد از این مرحله نتیجه تجزیه سوبسترا در اثر فعالیت آنزیم و تغییر رنگ محلول کروموژن ناشی از این واکنش است. شدت این رنگ متناسب با تعداد کمپلکس‌هاي ایمنی ایجاد شده در چاهک‌ها می‌باشد. با افزودن محلول متوقف کننده، رنگ آبی به زرد تبدیل می‌شود که بهترین جذب نوري را در طول موج 450 نانومتر دارد.

.

محتویات کیت:

.

• پلیت 96 خانه‌ای حاوي چاهک‌هايی با پوشش آنتی ژن‌هاي اختصاصی HCV .
• محلول آنزیم کونژوگه ( Enzyme Conjugate ): یک ویال حاوي 1 میلی‌لیتر کونژوگه غلیظ (20x)داراي منوکلونال آنتی‌هیومن IgG و IgM نشاندار شده با پراکسیداز که در محلول بافري حاوي پروتئین و نگهدارنده قرار دارد. این محلول را باید قبل از مصرف، با محلول رقیق کننده کونژوگه به نسبت 1/20 رقیق نمود.
• محلول رقیق کننده کونژوگه (Conjugate Diluent): یک ویال حاوي ml 15 محلول بافري سبز رنگ، داراي پروتئین به عنوان پایدار کننده و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ.
• محلول رقیق کننده نمونه (Sample Diluent): یک ویال حاوي ml 25 محلول بافري قرمز رنگ، داراي پروتئین به عنوان پایدار کننده و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ و %0/02 توئین، جهت رقیق‌سازي سرم‌ها.
• سرم کنترل مثبت (Positive Control): یک ویال حاوي ml 3 محلول بافري قرمز رنگ، داراي پروتئین به عنوان پایدار کننده و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ و سرم انسانی غیر فعال، حاوي آنتی‌بادي علیه HCV
• سرم کنترل منفی (Negative Control): یک ویال حاوي ml 5 محلول زرد رنگ داراي بافر فسفات و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ و سرم انسانی منفی از نظر آنتی بادي HCV
• محلول رنگزاي یک مرحله اي (Chromogen-substrate): ویال حاوي 12 میلی‌لیتر تترا متیل بنزیدین و آب اکسیژنه.
• محلول شستشو: یک ویال حاوي 50 میلی لیتر محلول شستشوي غلیظ (20x) محتوي محلول بافر فسفات و %0/05 توئین. جهت تهیه محلول شستشوي برای مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت 1/20 رقیق نمایید.
• محلول متوقف کننده (Stop Sloution): یک ویال حاوي 12میلی لیتر اسید کلریدریک 1 نرمال .
• برچسب مخصوص پلیت .

.

شرایط نگهداری:

.

• کیت را در یخچال بین دماي 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداري نمایید .
• چاهک‌ها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداري نمایید. پایداري پلیت بعد از باز کردن کیسه آن 4 ماه می‌باشد.
• پایداري محتویات کیت (قبل از باز شدن درب کیت) تا پایان مدت انقضاء بر روي هر یک از آن‌ها می‌باشد .
• محلول شستشو را به نسبت 1/20 با آب مقطر رقیق نمایید. این محلول به مدت یک هفته در شرایط 8 – 2 درجه سانتیگراد قابل نگهداري و مصرف می‌باشد.

نکات قابل ذکر برای مصرف کنندگان:

.

1. محتویات این کیت تنها براي مصرف در همین کیت قابل استفاده هستند .
2. این کیت صرفا جهت اندازه گیري HCV-Anti در سرم و پلاسماي انسانی است.
3. از مخلوط کردن محتویات کیتها با شماره ساختهاي مختلف جداً خودداري نمایید.
   کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود Ag.HBs و آنتی بادیهاي ضد HIV کنترل و فاقد این عوامل می‌باشند (کنترل مثبت کیت حاوي آنتی بادیهاي HCV و از نظرآنتی ژن HCV غیر فعال است. غیر فعال سازي سرم یا پلاسما بمدت نیم ساعت در 56 درجه سانتی گراد انجام شد).
4. جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار می کنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند .
5. هنگام انجام آزمایش حتماً از دستکشهاي یکبار مصرف استفاده کنید . همچنین استفاده از عینکهاي آزمایشگاهی هنگام کار با سرمهاي بیماران توصیه می شود .
6. سرم‌هاي مثبت از نظر آنتی بادیهاي ضد HCV ، وسایل و محلولهاي wash مشکوك به آلودگی را بعد از اتمام کار به مدت حداقل 30 دقیقه در مجاورت محلول هیپوکلریت سدیم %5 یا محلولهاي مناسب ضد عفونی کننده دیگر قرار دهید . همچنین اتوکلاو ، به مدت 20 دقیقه در 121 درجه سانتی گراد پیشنهاد می‌گردد .