به مناسبت هفته پژوهش، تا پایان آذرماه خدمات منتورینگ و آزمایشگاهی با تخفیف ویژه ارائه میشود.
برای دریافت اطلاعات بیشتر با این شماره 09351245641 تماس بگیرید.
[lwptoc]
کیت MTT برای سنجش قابلیت زندگی سلول با جذب در دستگاه میکروپلیت ریدر تحویل میدهد . MTT یک نمک تترازولیوم است که پس از کم شدن در اثر آنزیم های میتوکندریایی که فقط در سلول های زنده فعال متابولیک وجود دارند ، به یک محصول فورمازان بنفش تبدیل می شود. مقدار محصول فورمازان تولید شده اندازه با تعداد سلول های زنده در نمونه است.
مشحص شدن اندازه سلول های زنده گاهی برای اندازه گیری میزان تکثیر سلولی و سمیت سلولی ناشی از داروها و عوامل سیتوتوکسیک مورد استفاده قرار می گیرد.
برای اطلاعات بیشتر در مورد کیت MTT مقاله کیت MTT چیست؟ معرفی و کاربرد را بخوانید:
https://sciencebazar.com/%da%a9%db%8c%d8%aa-mtt-%da%86%db%8c%d8%b3%d8%aa%d8%9f-%d9%85%d8%b9%d8%b1%d9%81%db%8c-%d9%88-%da%a9%d8%a7%d8%b1%d8%a8%d8%b1%d8%af/
راه های متفاوتی برای سنجش قابلیت زندگی سلول وجود دارد که بر اساس نوع کاربرد سلول مثل فعالیت آنزیمی ، قابلیت نفوذ غشاء سلولی ، تولید ATP ، تولید کوآنزیم و کار های جذب نوکلئوتید طراحی شده است . در این میان MTT یکی از رایج ترین راه رنگ سنجی ، بر اساس فعالیت آنزیمی برای سنجش قابلیت حیات سلولها است و به طور گسترده برای بررسی توان القا یا مهار تکثیر انواع داروها، سایتوکاینها، فاکتورهای رشد ، میتوژن ها و سایر تیمارها را در in vitro استفاده می شود .
در سلول های زنده، میتوکندری ها نقش کلیدی در تولید انرژی از طریق متابولیسم هوازی ایفا میکنند. آنزیم های موجود در میتوکندری ها قادر به کاهش نمک تترازولیوم به کریستال های نامحلول فرمازان هستند. این کریستال ها سپس در DMSO یا ایزوپروپانول حل میشوند تا یک رنگ محلول ایجاد کنند که قابل اندازه گیری توسط اسپکتروفتومتر در طول موج 570 نانومتر است. شدت رنگ حاصل به طور مستقیم با تعداد سلول های زنده در نمونه مرتبط است. بنابراین، هرچه سلول ها بیشتر زنده باشند، رنگ بیشتری تشکیل میشود و جذب نوری بیشتری در اسپکتروفتومتر ثبت میشود.
سلول ها را با غلظت کار امد تعیین شده در مرحله قبل کشت دهید . برای هر ناپایدار ، سه چاهک ، هر چاهک 100 میکرولیتر کشت دهید . مطمئن شوید که آنقدر چاهک کشت داده اید که کنترل های بر پایه سلول و سه چاهک برای محیط کشت خالی داشته باشید .
سلول ها را انکوبه کنید تا ریکاوری بشه وباز هم به بستر اتصال پیدا کنند و با توجه به پروتکل آزمایشگاهی ست آپ شده خود ، آن ها را تیمار کنید.
برای سلول های چسبیده به بستر، محیط را کنار بگارید ، با PBS شستشو دهید و با محیط آماده مصرف RPMI1640 تعویض کنید. در مورد سلول های که متصل نیستند به بستر، میکروپلیت را سانتریفوژ کنید و سلول ها را رسوب دهید . با تمرکز و تا حد ممکن محیط را بردارید و آن را با 100 میلی لیتر محیط RPMI1640 جابه جا کنید .
سلول ها را با غلظت های متفاوت ترکیب مورد نظر برای 24 ساعت در دمای 37 درجه در انکوباتور CO2 تیمار کنید.
کیت MTT جهت بررسی میزان فعالیت متابولیکی سلول ها در نقش مشخصه زنده ماندن ، افزایش و سمیت سلولی مورد استفاده قرار می گیرد . سلول های زنده دارای آنزیم های اکسیدوردوکتاز نیازمند به NAD (P) H می باشند که MTT را به فرمازان کاهش می دهد .
ارسال محصول در دمای ۴ تا ۱۵ درجه سانتیگراد انجام میشود.
DMSO را در دمای محیط نگهداری شود . محلول MTT را تا زمان استفاده در فریزر قرار دهید . پودر MTT را در یخچال نگهداری شود .
بهترین کیت های MTT موجود در بازار را از ساینس بازار بخرید.
برای مشاوره رایگان و خرید با ما تماس بگیرید.
میتوان گفت کیت MTT به عنوان یکی از پرکاربردترین و معتبرترین ابزارهای سنجش سمیت و زندهمانی سلولی در محیط آزمایشگاهی، نقشی کلیدی در تحقیقات زیستپزشکی و داروسازی ایفا میکند. سادگی استفاده، دقت بالا، و قابلیت تطبیق با انواع تیمارهای دارویی و سلولی، این روش را به گزینهای ایدهآل برای ارزیابی فعالیت متابولیکی سلولها و تعیین اثرات سمی یا تحریککننده ترکیبات مختلف تبدیل کرده است. از اینرو، کیت MTT نه تنها به پژوهشگران کمک میکند تا پاسخهای سلولی را بهطور دقیق بررسی کنند، بلکه زمینهساز توسعه درمانهای نوین و غربالگری داروهای مؤثر نیز خواهد بود.
